登入
選單
返回
Google圖書搜尋
Selekcija dodekapeptidov, predstavljenih v bakterijski knjižnici, kot potencialnih inhibitorjev trombina
Tomaž Bratkovič
其他書名
Selection of dodecapeptides from bacterial display library as potential thrombin inhibitors : diplomska naloga
出版
Bratkovič T
, 2002
URL
http://books.google.com.hk/books?id=aiz_OQAACAAJ&hl=&source=gbs_api
註釋
Trombin je encim, ki ima osrednjo vlogo v procesu koagulacije, in je kot tak primerno prijemalisèe za uèinkovine z vplivom na strjevanje krvi. Danes poznani inhibitorji trombina izkazujejo nizko selektivnost, ali pa imajo relativno neoptimalno biolosko uporabnost, zato predstavlja odkrivanje in naèrtovanje novih tovrstnih uèinkovin aktualno podroèje raziskav v farmaciji. V prièujoèem diplomskem delu opisujemo selekcijo peptidov, predstavljenih v bakterijski knjiznici FliTrxä, ki izkazujejo afiniteto do vezave na trombin. Selekcionirani peptidi bi lahko bili aktivatorji ali pa (ne)kompetitivni inhibitorji encima. Slednji bi po morebitni potrditvi inhibitorne aktivnosti predstavljali nove spojine vodnice v naèrtovanju peptidomimetiènih zaviralcev trombina. Delo je potekalo v dveh stopnjah. Najprej smo z nizom poskusov, ki so temeljili na amidolitièni metodi za merjenje aktivnosti trombina, potrdili moznost adsorpcije encima na polimerno povrsino. Nato smo v selekcijskem procesu, sestavljenim iz petih ciklov inkubacije bakterij (s povrsinsko izrazenim peptidom) v suspenziji nad imobiliziranim trombinom in sledeèim izpiranjem nevezanih celic, selekcionirali tiste bakterijske klone, katerih peptidi so se najmoèneje vezali na encim. Iz 135 posameznih klonov smo izolirali plazmidno DNA s kodirajoèim zapisom za izrazen peptid in z dideoksi metodo doloèili nukleotidno zaporedje tega fragmenta. Nukleotidna zaporedja smo prevedli v aminokislinska. V 30 uspesno doloèenih zaporedjih smo iskali pentapeptidne motive, ki so se pojavili vsaj trikrat in ki jih je podpiralo najveè tetra- in tripeptidnih podmotivov. Na ta naèin smo prisli do 8 pentapeptidov z najveèjo afiniteto do trombina. Med temi motivi, ki bi jih bilo smiselno testirati na inhibitorno aktivnost do trombina, se zdi najpomembnejsi tisti s stirimi zaporednimi alifatskimi in konèno pozitivno nabito aminokislino.