返回Google圖書搜尋

Utišanje gena za katalitično podenoto cAMP odvisne proteinske kinaze pri glivi Aspergillus niger

其他書名	diplomska naloga
出版	N. Labanac, 1998
URL	http://books.google.com.hk/books?id=f-YTNQAACAAJ&hl=&source=gbs_api

註釋Namen diplomske naloge je iyolacija mutante glive Aspergillus niger A60 y okvarjenim oyiroma utiǴanim genom, ki kodira katalitiřno podenoto encima cAMP proteinske kinaye. V ta namen smo pripravili playmid pKOB, ki vsebuje okvarjengen pkaC, v katerega smo vgradili determinanto ya odpornost proti antibiotiku bleomicinu. S playmidom smo transformirali protoplastirane celice,kjer se je morala vstopajořa DNA ya ohranitev vgraditi v DNA recipientske celice. V primeru nadomestitvene integracije v mestu homologije genoma recipienta lahko pride do integracije utiǴanega gena pkaC playmida pKOBob istořasni konveryiji y genom pkaC, kar smo preverili y reakcijo PCR in s hibridiyacijo po Southern-u. V reakciji PCR smo DNA pomnoÍevali y dvema paroma yařetnih oligonukleotidov, od katerih par PEPC1/PEPC2 prilega na gen intracelularne proteaye glive A. niger in smo ga uporabili kot notranji standard ya kontrolo poteka reakcije PCR. Par PKAC13/PKAC14 pa pomnoÍi gen pkaC, vendar le v primeru, da je neokrnjen. Tudi y hibridiyacijo po Southern-usmo y iybrano sondo, oynařeno y biotinom, yaynali gen pkaC, le v primeru, da je ta ostal nespremenjen. Analiyirali smo 40 transformant in y obema metodama potrdili konveryijo in integracijo utiǴanega gena pkaC v genom transformante y oynako B15.