返回Google圖書搜尋

Vpliv deksametazona na izražanje lanosterolne 14(alfa)-demetilaze v človeških celičnih linijah

其他書名	The role of dexamethasone in expression of lanosterol 14(alpha)-demethylase in human cell lines : diplomska naloga
出版	Bjelan N., 2001
URL	http://books.google.com.hk/books?id=gIRfOwAACAAJ&hl=&source=gbs_api

註釋Lanosterolna 14 -demetilaza (CYP51) je eden kljuènih encimov pri biosintezi holesterola in najbolj ohranjen predstavnik naddruzine citokromov P450. V promotorskem podroèju èloveskega gena CYP51 obstajajo regulatorni elementi, preko katerih transkripcijski faktorji uravnavajo izrazanje lanosterolne 14 -demetilaze. Jedrni receptorji so so z ligandi aktivirani transkripcijski faktorji, ki posredujejo transkripcijsko aktivnost manjsih lipofilnih signalnih molekul, tako da se vezejo na regulatorne elemente promotorskega podroèja tarènega gena in vplivajo na njegovo izrazanje. Pregnanski X receptorsodi med novejse jedrne receptorje sirote, ki nimajo natanèno doloèenega endogenega liganda, temveè je siroko specifièen in se inducira s stevilnimi endogenimi in eksogenimi ligandi, med njimi tudi z zdravilnimi uèinkovinami. V diplomski nalogi smo zeleli ugotoviti, ali sintezni glukokortikosteroid deksametazon vpliva na izrazanje lanosterolne 14 -demetilaze v pogojih ex vivo in ali v tem mehanizmu uravnavanja izrazanja sodeluje tudi pregnanski X receptor. V nesmrtne èloveske celice smo vnesli sporoèilni plazmid D7-CAT, ki je sestavljen iz gena za kloramfenikol acetil transferazo pod kontrolo promotorja èloveske lanosterolne 14 -demetilaze. V nekatere celice smo vnesli se plazmid, ki omogoèa prekomerno izrazanje èloveskega pregnanskega X receptorja. Po transfekciji smo celice gojili v gojisèu brez ali z dodatkom deksametazona. Analiza aktivnosti encima kloramfenikol acetil transferaze nam je povedala, kako sta deksametazon in pregnanski X receptor vplivala na aktivacijo promotorja gena CYP51. Transfekcije HepG2 celic so dale slabo ponovljive rezultate, zato smo poskuse ponovili na celièni liniji JEG-3. Ugotovili smo, da deksametazon stirikrat poveèa izrazanje lanosterolne 14 -demetilaze preko do sedaj se neznanega mehanizma (ali mehanizmov) uravnavanja izrazanja, v katerem pa ne sodeluje pregnanski X receptor. Pregnanski X receptor, aktiviran z endogenimi ligandi, le sibko stimulira izrazanje gena CYP51. 5,6-kratno aktivacijo promotorja lanosterolne 14 -demetilaze pa smo dobili pri kotransfekciji celic s plazmidom, ki omogoèa prekomerno izrazanje pregnanskega X receptorja, in ob dodatku deksametazona. Potrebni bi bili dodatni poskusi, ki bi statistièno nedvoumno potrdili vpliv pregnanskega X receptorja, aktiviranega z endogenimi ligandi inžali deksametazonom, na izrazanje lanosterolne 14 -demetilaze. Dokazali smo, da izrazanje gena CYP51 ni uravnavano le z endogeno potjo (negativna povratna zanka holesterolžod sterolov odvisni DNA regulatorni element vezavni proteini), temveè da obstaja tudi eksogena pot aktivacije biosinteze holesterola. Preko nje deksametazon vpliva na endogeni metabolizem holesterola. Èeprav je statistièno nismo uspeli dokazati, obstaja moznost, da izrazanje lanosterolne 14 -demetilaze aktivira tudi pregnanski X receptor, katerega ligandi so stevilne zdravilne uèinkovine. Z boljsim razumevanjem eksogene poti uravnavanja gena CYP51 bi pridobili ogromno novih informacij o metabolizmu holesterola, stranskih uèinkih deksametazona in vplivu ligandov pregnanskega X receptorja na biosintezo holesterola.